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EVALUATION OF DNA EXTRACTION METHODS FROM DRIED AND FROZEN TOMATO LEAVES FOR DETECTING BEGOMOVIRUSES EVALUACIÓN DE MÉTODOS DE EXTRACCIÓN DE AND DE HOJAS DE TOMATE SECAS Y CONGELADAS PARA DETECCIÓN DE BEGOMOVIRUS POR PCR


Seis protocolos de extracción de AND para hojas de tomate [Solanum lycopersicum (Mili)] secas y congeladas fueron evaluados para la determinación de begomovirus utilizando la reacción en cadena de polimerasa (PCR). La comparación de los métodos de extracción se basó en la cantidad y calidad del AND, costo de extracción y tiempo de procesamiento. Fueron evaluadas cuatro muestras de hojas de tomate secas y congeladas, recolectadas en los estados venezolanos de Zulia, Mérida y Táchira. La concentración de AND y la relación de absor-bancias a 260 y 280nm fueron determinadas por espectrofoto-metría. La detección de begomovirus se llevó a cabo utilizando cebadores degenerados para los componentes virales A y B (AND-A y AND-B), y la intensidad de las bandas de PCR sernregistró usando una escala visual. El método SDS produjo mayor cantidad y calidad de AND, y es más económico y rápido que los otros protocolos de extracción ensayados. El AND-B de begomovirus fue más consistente en la amplificación que el AND-A, sugiriendo una mayor variabilidad del componente A. Los pellets de AND resuspendidos minimizaron los efectos de inhibidores en la amplificación debido a la alta sensibilidad de la técnica de PCR, lo que también permitió la detección de begomovirus, incluso utilizando pequeñas cantidades de tejido de hojas secas y congeladas. El AND aislado por el método SDS provee una opción sencilla y económica para la detección de begomovirus en tomate usando PCR, y podría ser empleado para estudios epidemiológicos de gran escala.%Six DNA extraction protocols for dried and frozen tomato /Solarium lycopersicum (Mill)] leaves were evaluated to detect begomoviruses using polymerase chain reaction (PCR). The extraction method comparisons were based on DNA quantity and quality, extraction cost, and processing time. Four samples of dried and frozen tomato leaves, collected in the Venezuelan states of Zulia, Merida and Tdchira, were evaluated. The DNA concentration and the ratios of 260 and 280jum absorbances were measured using spectrophotometry. Begomovirus detection was performed using degenerate primers for viral components A and B (DNA-A and DNA-B), and PCR band intensity was recorded using a visual scale. The SDS method produced greater DNA quantity and quality, and it is faster and less expensive than the other extraction protocols tested. Begomovirus DNA-B was more consistent in amplification than DNA-A, suggesting higher variability of the A component. Resuspended DNA pellets minimized the effects of inhibitors on the amplification because of the high sensitivity of the PCR technique, which also allowed begomovirus detection even when using small amounts of dried and frozen leaf tissue. The DNA isolated by the SDS method provides a simple and economical option for begomovirus screening in tomato using PCR, and could be used for large-scale epidemiological studies.......

【作者名称】: Carla Mendez, Alfredo Faria, Francisco Osorio-Acosta, Alba Nava
【作者单位】: Biologist, La Universidad del Zulia (LUZ),Venezuela. M.Sc. student,Universidad Politecnica deValencia, Spain, Agronomical Engineer, LUZ, Venezuela.Doctoral student, Universidad de Cordoba, Spain. Professor,LUZ, Venezuela, in Phytopathology, University of California, EEUU. Professor Researcher, Colegio dePostgraduados, Veracruz,Mexico, Department of Agronomy, LUZ. A.P. 15205,Maracaibo, Venezuela
【关 键 词】: , ctab, dna isolation, geminiviridae, sds evaluación de métodos de extracción de adn de hojas de tomate secas y congeladas para detección de begomovirus por pcr
【期刊名称】: Interciencia
【期刊论文数据库】: [DBS_Articles_01]
【期刊论文编号】: 107,248,786
【摘要长度】: 2,901
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